原代人肝细胞CYP诱导评估新模型：TCS三培养体系应用研究
摘要
在药物研发过程中，细胞色素P450（CYP）酶的体外诱导评估是关键环节。传统方法多依赖三明治培养体系（Sandwich Culture, SC）的原代人肝细胞（PHH）。本文基于全人源三培养体系（TCS），系统评估其在CYP基础表达及诱导响应中的表现，为新型体外模型在DMPK研究中的应用提供参考。
一、引言
在药物研发阶段，新型化合物对主要细胞色素P450（CYP）酶的体外诱导潜能评估是关键环节。传统方法多采用三明治培养的原代人肝细胞（PHH）。
尽管PHH模型结合监管指南通常可以较好预测临床诱导风险，但对于新型肝细胞模型在CYP诱导评估中的表现，目前仍有待进一步研究。
本研究评估了一种全人源三培养体系（TCS），用于检测：
- CYP酶基础表达水平
- 核受体表达水平
- 原型诱导剂处理后的CYP诱导能力
旨在探索该体系在体外诱导研究中的应用潜力。
二、材料与方法
1、4周培养期内基因基础表达评估
- 将原代人肝细胞（PHH）与饲养细胞接种至24孔胶原包被板构建TCS
- 在不同时间点使用Trizol裂解细胞
- 氯仿法提取RNA并合成cDNA
- 使用QuantStudio 7系统进行qPCR检测
- 采用ΔΔCt方法计算表达变化
2、CYP诱导响应评估
- 在96孔板构建TCS体系
- 培养至第10天加入原型诱导剂（含0.1% DMSO）
- 暴露48小时（24小时更换培养基）
- 提取RNA并进行qPCR检测
- 使用GraphPad Prism计算Emax与EC₅₀
表1. CYP诱导评估所使用的阳性诱导剂
表2. 肝细胞供体信息
三、结果
1、内参基因筛选
结果显示不同内参基因Ct值存在差异，其中：
👉GAPDH在整个培养周期中表现最稳定
2、CYP及核受体基础表达
在TCS建立后：
- 第4–12天表达显著提升
- 第7–12天达到峰值
- CYP1A1与CYP2E1变化较小
3、CYP诱导能力评估
经48小时诱导后：
- 所有主要CYP酶均表现出诱导响应
- 包括CYP2C家族
👉 当诱导剂浓度过高时，诱导效应出现下降趋势
四、结论
- TCS体系中，CYP及核受体在4–12天内显著上调
- 多数基因表达在第7–12天达到峰值
- 各主要CYP酶均具有良好诱导响应能力
- 高浓度诱导剂可能降低诱导效果
五、应用意义
TCS体系可用于：
- CYP诱导研究
- DMPK评估
- 药物代谢机制研究
- 体外-体内相关性分析（IVIVE）
FAQ（提高收录）
Q1：TCS体系相比SC体系优势是什么？
在长期培养和CYP表达稳定性方面表现更优。
Q2：为什么选择第10天进行诱导？
此时CYP表达接近峰值，适合进行诱导实验。
Q3：是否适用于高通量筛选？
可在多孔板体系中应用，具备一定扩展性。
延伸阅读
https://www.mine-bio.com/LifeNet_PrimaryCells_Medium/?utm_source=csdn&utm_medium=referral&utm_campaign=lifenet_article
本文基于LifeNet相关技术资料由其中国提供商上海曼博生物整理，仅用于科研信息分享。